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簡(jiǎn)要描述:轉(zhuǎn)基因快速檢測(cè)試紙用特異性抗 Cry1Ab/1Ac 單抗包被的微孔板和酶標(biāo)記抗 Cry1Ab/1Ac 單抗,雙抗體夾心法檢測(cè) Cry1Ab/1Ac 基因表達(dá)產(chǎn)物,可以高靈敏度和特異性的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物中的 Bt-Cry1Ab/1Ac 蛋白。
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【 試劑盒原理】
轉(zhuǎn)基因快速檢測(cè)試紙用特異性抗 Cry1Ab/1Ac 單抗包被的微孔板和酶標(biāo)記抗 Cry1Ab/1Ac 單抗,雙抗體夾心法檢測(cè) Cry1Ab/1Ac 基因表達(dá)產(chǎn)物, 轉(zhuǎn)基因快速檢測(cè)試紙可以高靈敏度和特異性的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物中的 Bt-Cry1Ab/1Ac 蛋白。
【試劑盒組份(規(guī)格)】
預(yù)包被板(抗 Cry1Ab/1Ac 單抗) 12 孔×8
Cry1Ab/1Ac 酶標(biāo)抗體 12 ml×1 瓶
20×濃縮洗滌液 30 ml×1 瓶
5×抽提液/稀釋緩沖液 30 ml×1 瓶
底物液 A 7 ml×1 瓶
底物液 B 7 ml×1 瓶
終止液 7 ml×1 瓶
使用說明書 1 份
0ppb 陰性對(duì)照 1ml
4 個(gè)不同濃度的標(biāo)樣:
0.5 ppb 1.0 ppb 2.0 ppb 4.0 ppb 各 1ml
【試劑準(zhǔn)備】
試劑盒中的 20×濃縮洗滌液 30 ml 加 570 ml 滅菌 ddH2O 溶解稀釋至 1×洗滌液,5×抽提液(30 ml)加 120 ml ddH2O 稀釋至 1×抽提液,4℃存放備用。
【樣品準(zhǔn)備】
稱取約 20 mg 葉片,加 0.5 ml 1×抽提液(使用前 30 min 放置室溫)研磨至勻漿,室溫放置 30 min,測(cè)定前把樣品上清液稀釋 5-20 倍。
測(cè)定莖干和胚乳中的 Bt 蛋白時(shí),樣品稱取約 40 mg,加 1 ml 1×抽提液研磨。
【ELISA 反應(yīng)】
1. 依次加 100 μl 陰性對(duì)照,標(biāo)準(zhǔn)品(4 個(gè)不同濃度的標(biāo)樣:0.5 ppb,1.0 ppb,2.0 ppb, 4.0 ppb)和待測(cè)樣品至 96 孔板;
2. 用封口膜蓋住 96 孔板,快速搖動(dòng)平板混勻樣品;
3. 37℃恒溫箱孵育 30 min;
4. 倒掉 96 孔板中液體,每孔加入 1×洗滌液 250 μl 洗滌微孔板,洗板 5 次,用吸水紙拍干;
5. 按順序在每個(gè)小孔中加入 100 μl Cry1Ab/1Ac 酶標(biāo)抗體,然后重復(fù)步驟 2;
6. 37 ℃恒溫箱孵育 30 min;
7. 倒掉 96 孔板中液體,每孔加入 1×洗滌液 250 μl 洗滌微孔板,洗板 5 次,用吸水紙拍干;
8. 依次加入 50 μl 底物 A 液,50 μl 底物 B 液,重復(fù)步驟 2;
9. 室溫(20-25℃)避光孵育 10 min,加 50 μl 終止液,充分混勻終止反應(yīng),15min 以內(nèi)在酶標(biāo)儀上讀取結(jié)果。 在 450 nm 為主波長,630 nm 為次波長(或單波長 450 nm)下,用空白孔校零,再讀取各孔 OD 值。
【轉(zhuǎn)基因測(cè)試盒使用注意事項(xiàng)】
1. 測(cè)定中需使用的所有試劑和 96 孔板提前 30 min 放置室溫溫育(否則會(huì)影響試驗(yàn)準(zhǔn)確性),注意12 連管必須溫育后再從平板上取下,未使用完的預(yù)包被板條應(yīng)置于有干燥劑的封口袋中密封保存;
2. 試劑使用前應(yīng)充分搖勻;
3. 搖動(dòng)平板混勻時(shí)注意避免樣品之間交叉污染;
4. 使用洗滌液漂洗時(shí),洗滌液需要填滿每個(gè)小孔,進(jìn)行充分漂洗;
5. 研磨好的樣品如果不能一次全部測(cè)量,可以暫時(shí)在 4 ℃避光保存,但是最好在 24 h 內(nèi)測(cè)定;
6. 結(jié)果判讀請(qǐng)?jiān)诜磻?yīng)終止后 15 min 內(nèi)完成。
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